Evaluation of techniques for diagnosis of Trypanosoma vivax infections in naturally infected cattle in the Zona da Mata Mineira / Avaliação de técnicas para diagnóstico de infecções por Trypanosoma vivax em bovinos naturalmente infectados na Zona da Mata Mineira

Abstract This study aimed to evaluate diagnostic techniques for trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, in naturally infected cattle in Minas Gerais, Zona da Mata. The deaths of six lactating cows with similar clinical conditions—characterized by hyporexia, hypogalactia, and recumbency—had been reported from one property. Initially, two animals were examined and diagnosed with trypanosomiasis through identification of the protozoan in a blood smear. After the initial diagnosis, all lactating cows (n=37) on the property were examined, and blood samples were collected for tests including whole blood smear, buffy coat smear, Woo's technique, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and polymerase chain reaction (PCR). Woo's test, buffy coat smears, and whole blood smears indicated that 4/37 (10.81%) animals were positive for trypanosomiasis, whereas ELISA and PCR indicated that 33/37 (89.19%) and 27/37 (72.97%) animals, respectively, were positive. The agreement obtained between parasitological techniques was classified as high, while between ELISA and PCR, no agreement. In conclusion, parasitological techniques have a low capacity to identify infected animals in the chronic stage of T. vivax infection. Therefore, techniques such as PCR and/or ELISA should be used to minimize the occurrence of false negatives.

Resumo Este estudo objetiva avaliar as técnicas de diagnóstico da tripanossomíase, causada pelo Trypanosoma vivax, em bovinos naturalmente infectados, em Minas Gerais, Zona da Mata. A morte de seis vacas em lactação com condições clínicas semelhantes - caracterizadas por hiporexia, hipogalaxia e decúbito - foi relatada em uma propriedade. Inicialmente, dois animais foram examinados e diagnosticados com tripanossomíase através da identificação do protozoário em esfregaço sanguíneo. Após o diagnóstico inicial, todas as vacas em lactação (n = 37) na propriedade foram examinadas, e amostras de sangue foram coletadas para testes, incluindo esfregaço de sangue total, esfregaço de capa leucocitária, técnica de Woo, ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação em cadeia da polimerase (PCR). O teste de Woo, os esfregaços de capa leucocitária e de sangue total indicaram que 4/37 (10,81%) animais foram positivos para tripanossomíase, enquanto ELISA e PCR indicaram que 33/37 (89,19%) e 27/37 (72,97%) animais, respectivamente, foram positivos. A concordância entre técnicas parasitológicas foi classificada como alta, enquanto entre ELISA e PCR, sem concordância. As técnicas parasitológicas apresentam baixa capacidade para identificar animais infectados na fase crônica da infecção por T. vivax. Dessa forma, técnicas como PCR e/ou ELISA devem ser utilizadas para minimizar a ocorrência de falsos negativos.

Enzootic instability for bovine anaplasmosis on family farms located in southwestern Paraná, Brazil / Instabilidade enzoótica para anaplasmose bovina em propriedades de agricultura familiar do sudoeste paranaense, Brasil

Abstract The objective of this study was to assess the occurence of animals seropositive for Anaplasma marginale in the municipality of Realeza, Paraná State, Brazil. Blood samples were collected from 344 cows on 18 small farms in the municipality of Realeza-PR. The animals’serum samples were forwarded to the Federal University of Fronteira do Sul, in order to investigate the occurrence of anti-A. marginale IgG antibodies by an enzyme-linked immunosorbent assay commercial kit. IgG antibodies to A. marginale were detected in cattle from 77.7% of the farms. To the best author's knowledge, this is the first report of occurrence of A. marginale in cattle in southwestern Paraná. The serological assay showed that 24.4% of the animals were seropositive, thus characterizing the location investigated as an area of enzootic instability for the disease. The family farms located in the municipality of Realeza-PR showed enzootic instability for bovine anaplasmosis. It is necessary to conduct disease monitoring programs in association with preventive measures in order to ensure the sanitary quality of the herds and to reduce economic losses for the farmers. In addition, it is essential to implement educational extension actions that allow farmers to acquire knowledge, attitudes and perceptions regarding the risk factors that contribute towards herd A. marginale-infection.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de animais soropositivos para Anaplasma marginale, no município de Realeza, Estado do Paraná, Brasil. Foram colhidas amostras de sangue de 344 fêmeas bovinas provenientes de 18 propriedades rurais do município de Realeza - PR. Amostras de soro dos animais foram encaminhadas à Universidade Federal da Fronteira Sul, para realização do Ensaio Imunoenzimático Indireto para pesquisa de anticorpos IgG anti- Anaplasma marginale por meio de kit comercial. Anticorpos IG anti-A. marginale foram detectados em 77,7% das propriedades. Trata-se do primeiro registro da ocorrência de A. marginale no Sudoeste paranaense. A sorologia evidenciou 24,4% de animais soropositivos, caracterizando o local pesquisado como área de instabilidade enzoótica para a doença. As propriedades de agricultura familiar, localizadas no município de Realeza-PR, apresentaram instabilidade enzoótica para anaplasmose bovina. É necessário que programas de monitoramento da enfermidade sejam realizados em conjunto com medidas de prevenção, visando garantir qualidade sanitária do rebanho e reduzir perdas econômicas dos produtores rurais. Além disso, é fundamental a realização de ações de extensão que viabilizem a aquisição de conhecimento, atitude e percepção dos criadores diante dos fatores de risco contribuintes para a infecção por A. marginale do rebanho.

Alterações hematológicas e bioquímicas causadas por Anaplasma marginale em bovinos com aptidão leiteira da região Sudoeste do Paraná / Changes hematological and biochemical caused by Anaplasma marginale in dairy cattle suitability of southwest region Paraná

O objetivo deste trabalho foi descrever as complicações hematológicas e bioquímicas em bovinos da região Sudoeste do Paraná infectados por Anaplasma marginale, comparando estas alterações com os parâmetros apresentados por bovinos sadios da mesma região. Foram avaliadas 40 vacas com aptidão leiteira, sendo 20 clinicamente suspeitas de estarem infectadas pelo parasito e outras 20 sadias, que serviram como grupo controle. O hemograma foi realizado em contador hematológico automático. Para a contagem diferencial de células brancas e pesquisa do agente realizou-se esfregaço sanguíneo. As análises de albumina, proteínas totais (PT), uréria, creatinina, aspartato-aminotrasferase, e gama-glutamiltransferase séricas, foram realizadas em analisador bioquímico semi-automático. Os resultados obtidos foram avaliados através do programa SPSS, versão 20.0, sendo submetidos ao Teste t de Student. O diagnóstico foi realizado pela identificação do hemoparasito em esfregaço sanguíneo. Os animais infectados apresentaram uma parasitemia que variou de 11 a 20%. Constatou-se diferença estatística significante (p<0,01), entre os seguintes parâmetros: hematócrito das infectadas (17,99±1,49%) e sadias (29,38±0,96); número de hemácias das infectadas (3,71±0,39x106 /µL) e sadias (7,23±0,37x106 /µL); hemoglobina das infectadas (6,08±0,65g/dL) e sadias (9,96±0,33g/dL); VCM das infectadas (52,60±3,07fL) e sadias (41,34±1,31fL); monócitos das infectadas (1353,27±373,61/µL) e sadias (517,84±113,22/µL); PT (proteínas totais) das infectadas (7,60±0,18g/dL) e sadias (5,90±0,28g/dL). Os animais infectados apresentaram acentuada anemia e aumento sérico das PT. Conclui-se que estes hemoparasitos provocam monocitose e sinais clínicos graves decorrentes da anemia acentuada, porém não alteram os marcadores da função hepática e renal de bovinos na forma clínica de Anaplasmose.

The objective of this study was to describe the hematological and biochemical complications in cattle of southwestern Paraná region infected with Anaplasma, comparing these changes with the parameters presented by healthy cattle from the same region. We evaluated 40 cows with milk aptitude, 20 clinically suspected of being infected by the parasite and other 20 healthy, which served as a control group. Blood counts were performed in automated hematology counter. For the differential white cell count and agent search was held smears. Albumin analysis, total protein (TP), urea, creatinine, aspartate-aminotransferase and serum gamma-glutamyl transferase were carried out in semi-automatic biochemical analyzer. The results were evaluated using SPSS, version 20.0, and submitted to the Student t test. The diagnosis was made by identifying the hemoparasite in blood smears. Infected mice had a parasitemia ranging from 11 to 20%. We found statistically significant differences (p<0.01) among the following: hematocrit of infected (17,99±1,49%) and healthy controls (29,38±0,96%); number of red blood cells infected (3,71±0,39x106 / µL) and healthy controls (7,23±0,37x106 /µL); of infected hemoglobin (6,08±0,65g/dL) and healthy controls (9,96±0,33g/dL); VCM infected (52,60±3,07fL) and healthy controls (41,34±1,31fL); of infected monocytes (1353,27±373,61/µL) and healthy controls (517,84±113,22/µL); PT (total protein) of infected (7,60±0,18g/dL) and healthy controls (5,90±0,28g/dL). Infected animals showed marked anemia and serum increase in PT. We conclude that these blood parasites cause monocytosis and severe clinical signs resulting from severe anemia, but do not alter markers of liver and renal function of cattle in the clinical form of Anaplasmosis.

Pythiosis in sheep from Paraná, southern Brazil / Pitiose em ovinos no Paraná, Sul do Brasil

This paper reports pythiosis in a sheep from southwestern Paraná, Brazil, confirmed by indirect ELISA (Enzime-Linked Immunosorbent Assay) and immunohistochemistry, as well as it describes the macro and microscopic injuries, in order to understand the pathogenicity. A 4-year-old ewe from a flock of 30 Santa Inês sheep, raised semi-extensively with access to a weir, showed cachexia, bilateral enlargement in nasal region, a serous and bloody secretion with a fetid odor from its nose and swollen submandibular and retropharyngeal lymph nodes. Blood collection was performed trough jugular vein puncture in order to make complete blood cell count (CBC) and to obtain serum for the subsequent serological examination...

Este trabalho tem como objetivo descrever um caso de pitiose confirmado por ELISA (Enzime-Linked Immunosorbent Assay) indireto e imuno-histoquímica em uma ovelha do sudoeste do Paraná, Brasil, bem como suas lesões macro e microscópicas, a fim de compreender a sua patogenicidade. Trata-se de um ovino, fêmea, de 4 anos de idade, de um rebanho de 30 animais, da raça Santa Inês, criados em sistema semiextensivo, com acesso à um açude. O animal vinha apresentando aumento de volume na região do focinho, associado a emagrecimento progressivo. No exame físico apresentou-se caquético, com aumento de volume bilateral na região nasal, e com uma secreção serosanguinolenta de odor fétido fluindo das narinas, além de possuir os linfonodos submandibulares e retrofaríngeos bilateralmente infartados. Foi realizada coleta de sangue por punção da veia jugular para realização do hemograma e obtenção do soro para posterior realização de exame sorológico....

Cão naturalmente infectado por Trypanosoma evansi em Santa Maria, RS, Brasil / Dog naturally infected by Trypanosoma evansi in Santa Maria, RS, Brasil

Descreve-se, neste trabalho, as alterações hematológicas e o proteinograma de um cão naturalmente infectado por Trypanosoma evansi. Este animal apresentou anemia normocítica normocrômica, leucopenia com linfopenia seguida por neutropenia e linfocitose; trombocitopenia; hiperproteinemia com aumento das frações beta e gama globulinas e hipoalbuminemia. Por ser este o primeiro relato de infecção por T. evansi em cães no município de Santa Maria, RS, destaca-se a sua importância epidemiológica, alertando os médicos veterinários para a existência de reservatórios do parasita na região e para a possibilidade de novos achados laboratoriais.

This paper describes the hematological alterations and proteinogram of a dog naturally infected by Trypanosoma evansi. This dog was presented with normochromic-normocytic anemia, leucopenia with lymphopenia followed for neutrophenia and lymphocitosis; and trombocitopenia. Hyperproteinemia with an increase of beta and gamma globulin fractions and hypoalbuminemia. By being the first case reported of T. evansi infection in dogs in Santa Maria, RS, Brazil, the epidemiological significance of such findings will alert the veterinarians to the existence of a possible parasite's reservoir in the region warning to the possibility of new laboratory findings.

Reticulócitos e hematócrito de cães pré e pós esplenectomia parcial / Reticulocytes and hematocrit of dogs before and after partial splenectomy

Os reticulócitos são células eritróides que exibem RNA residual e são liberados da medula óssea em resposta à hipoxia tecidual. Após sua liberação da medula óssea, ficam temporariamente seqüestrados no baço, onde adquirem forma de eritrócitos maturos. Além disso, o baço também é responsável pelo armazenamento do sangue e seus elementos. A esplenectomia é indicada para casos de torção ou ruptura esplênica, esplenomegalia sintomática e massas esplênicas. Este estudo tem como objetivo avaliar a resposta dos reticulócitos e do hematócrito em cães submetidos à remoção parcial do baço. Para isso, foram utilizados nove cães, sem raça definida, machos e fêmeas. As coletas foram feitas uma hora antes e 48, 96, 144 e 168 horas após o procedimento cirúrgico. Os resultados demonstraram que o hematócrito diminuiu significativamente após a esplenectomia parcial. O valor máximo de reticulócitos foi alcançado 96 horas após a cirurgia, a partir daí houve um declínio na quantidade de reticulócitos na corrente sangüínea, permanecendo, porém, em número superior à condição pré-esplenectomia parcial.

The reticulocytes are erythroid cells that exhibit residual RNA, being released from bone marrow by erythropoietin stimulus in response to tissue hypoxia. After its release from bone marrow, they are temporarily sequestred in the spleen, where they acquire form of mature erythrocytes. Besides, the spleen is also responsible for storage of the blood and their elements. The splenectomy is indicated in cases of splenic torsion or rupture, symptomatic splenomegaly, and splenic masses. This study aimed to evaluate the response of reticulocytes and of hematocrit in dogs submitted to partial splenectomy. Nine mongrel males and female dogs were used. The samples were obtained one hour before the surgery and 48, 96, 144 and 168 hours after this procedure. The findings demonstrated that the hematocrit decreases significantly after the partial splenectomy. Highest values reticulocytes were reached 96 h after the surgery, followed by a decline in number, nevertheless, the counting was higher than moments before of the partial splenectomy.